别藻蓝蛋白(Allophycocyanin ,APC,以下简称APC)是一种从红藻中提纯的高亮度藻胆蛋白分子量104kDa,属于远红色荧光,具有很高的量子产量。激光594 nm和633 nm处激发其发光,在650 nm处吸收峰最大,在660 nm处荧光发射峰最大。APC比普通的化学发光强100倍,在普通应用中,其至少可以提高灵敏度5-10倍,主要用于流式细胞术、微阵列分析、ELISAs等。APC主要优点是发射长波荧光,抗淬灭性强,高水溶性,均质结构,分子量确定。
基本原理:
利用抗体和APC上游离的氨基,采用定向对接偶联技术将抗体分子与APC共价偶联,
别藻蓝蛋白标记抗体
1).抗体的修饰
a. 取待标记抗体(纯度>90%),用标记缓冲液(0.1M PBS pH 7.2)调整到 2mg/ml左右为宜,按照每mg抗体加入一定量抗体修饰试剂溶液,轻轻混匀,在室温下避光搅拌反应 90分钟;【如果抗体量太少,抗体修饰试剂溶液加入量不少于0.5ul】
b. 反应完毕后,将其转入30K MWCO超滤管,用标记缓冲液超滤5-10次(每次12000rpm 1min),每次管芯内液体体积不超过原体积1/4为宜,最后一次超滤完成,管芯内液体即为修饰的抗体。
2).活化APC蛋白与抗体偶联
a. 将修饰抗体与活化APC蛋白溶液混合(每1mg修饰抗体对应62.5ul活化APC溶液),室温避光反应1小时;
b. 标记好的抗体分装,加入适当保护剂,-20℃保存备用。
货号 |
产品名称 |
规格 |
ARL0023K-1 |
别藻蓝蛋白抗体快速标记试剂盒 |
0.5mg |
别藻蓝蛋白抗体快速标记试剂盒